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狗原代脾臟NK原代細胞

商品屬性：

形態(tài)：
培養(yǎng)基：豚鼠外周血NK細胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代特征：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

細胞基本屬性：

種屬來源：狗

組織來源：實驗動物脾臟實驗動物脾臟

生長特性：懸浮生長

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：:自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。                  自然殺傷細胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用， 體外培養(yǎng)時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對NK細胞的活性有抑制作用。

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

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